(1) 插入探头并通过活体采卵仪观察卵巢
将耦合剂涂抹在探头前端并将其插入母牛阴道。首先,我们将通过采卵仪观察卵巢以了解其中的卵泡状态。
将卵巢压在探头上,获取卵巢超声断层图像,使卵巢出现在屏幕中央(看下图)
并在探头表面缓慢滑动卵巢,直至卵巢从屏幕上消失,并对卵泡进行计数。为了了解探头和卵巢之间的位置关系,卵巢必须始终位于中心,这一点很重要。这样,就可以对左右卵巢中的卵泡进行计数,并确定大卵泡与黄体的相对位置。
(2)将采卵针从阴道壁引导至卵巢
完成左右卵巢的检查后,将采卵针链接采卵管,将其插入探头上的导向器中,并将探头引导至宫颈外口上方的阴道壁。插入直肠的手将卵巢引导至探头尖端,卵巢显示在采卵仪的屏幕上。将卵巢固定在屏幕上最大的可见位置,然后将采卵针穿过阴道壁插入卵巢。使阴道壁与采卵针之间的角度为90度(垂直),垂直进针时,如果卵巢内有较大的卵泡或黄体,可稍微移动针头,避免刺破这些。当采卵针穿过阴道壁出来时,会对阴道壁施加压力,所以图像会暂时变成漆黑,但一旦穿过阴道壁,图像就变得清晰,在超声图像上可以看到采卵针。(看下图)
一旦采卵针穿过阴道壁后,在卵泡抽吸过程中尽量不要将采卵针返回阴道,将针尖保持在腹腔内进行采卵。
(3)牛卵泡穿刺
由于采卵针仅沿着引导线移动,将取卵针推进到卵泡中,并吸出卵母细胞连同卵泡液,重复这个操作将可抽取卵泡全部抽取出来。如果有较大的卵泡,请将其留作最后抽吸。一旦屏幕顶部的卵泡被吸出,将卵巢旋转 180 度并将卵巢背面压在探头上。然后,先前显示在卵巢底部的卵泡将显示在屏幕顶部,再次将这些卵泡清楚地标记在引导线上,然后将它们一一吸出。如果在引导线上可以看到多个卵泡,则可以进行连续抽吸。在所有中小卵泡被吸出后,最后吸出大卵泡。之所以把大卵泡留在最后,是为了更容易保定卵巢。如果先抽吸大卵泡,卵巢就会变小,失去坚固性,后面就不太好抽吸了。
从带有黄体的卵巢抽吸卵泡时,必须小心不要刺穿黄体。由于黄体有很多毛细血管,容易出血,血液在针管内凝固,很容易造成堵塞,将探头贴在卵巢上,通过改变角度,使黄体不出现在图像中。
(4)牛卵泡抽吸注意事项
下面列出了牛卵泡抽吸的基本注意事项(技术人员个人的经验,不一定非要遵循)。
① 穿刺卵泡时,靠近针尖的卵泡很容易被吸出,而远离针头(如果针扎得深)的卵泡则很难被吸出。
② 特别是在穿刺小卵泡时,首先将针尖靠近卵泡,清晰地投影出卵泡的轮廓(这样更容易将针刺入卵泡中心),并测量针的行进距离尽量让它短一些,这样更容易被刺穿。
③ 握住卵巢很重要,因此用拇指和食指捏住卵巢韧带末端,用中指和无名指将卵巢韧带的卵巢侧压在探头上,用手掌压住探头侧面。拇指和小指,用指尖触摸卵巢(切勿用力按压)。
④卵巢也支撑在食指、中指、无名指的第一、第二关节之间。
④卵巢也支撑在食指、中指、无名指的第一、第二关节之间。
⑤如果在针刺的一面的另一侧没有④的指法的话,卵巢的保定会变得困难。
⑥如果卵泡或黄体较大,则更容易保定卵巢。
⑦另一方面,大卵泡吸出后很难保定卵巢,而大卵泡两侧的小卵泡几乎不可能吸出。因此,尽可能从小卵泡中吸出。
⑧在穿刺屏幕左侧的卵泡时,取卵针的角度可能会导致针在卵巢表面滑动而没有插入。在这种情况下,改变卵巢的角度,将针尖插入卵巢,获得所需卵泡的清晰图像,然后引导针进入卵泡。
⑨有些采卵针与导向器之间有间隙,取卵针偏离中心,属正常现象。 因此,尽管针在图像中看似插入卵泡,但实际上它通常并未刺入卵泡。这种情况下,可以向任一方向进针,只需将针稍微退回,稍微改变角度,即可实现上、下、左、右四个方向的进针。通过以相同角度插入针头,可以抽吸附近的大部分卵泡。
⑩如果采卵针或管内进入空气,卵子的卵丘细胞很容易脱落,所以尽量避免让空气进入管内。
⑪必须始终施加吸气压力。清洁取卵针时,如果在针尖位于腹腔内时关闭抽吸装置,液体可能会回流到针尖,因为腹腔内容易产生负压。
⑫因此,清洗时,不要关闭负压泵开关,而是用输液器塞子或镊子暂时封闭管子,防止液体倒流。