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牛胚胎冷冻标准

作者:admin | 发布时间:2022-11-10 17:40 | 标签:胚胎冷冻冷冻胚胎
如果您需要做牛的胚胎冷冻,则应有以下设备和用品。

牛马胚胎冷冻仪
 
• 液氮(3-4 升);保温杯胚胎运输箱
• 显微镜(用于搜索的相同)
• 0.25cc 黄色吸管、47mm 黄色吸管塞、13mm 黄色高脚杯、铝制手杖
• 带黄色标签纸的布雷迪标签打印机;永久性墨水标记
• ABC胚胎采集-转移-冷冻表格;关于供体和冲洗公牛的信息
• 35mm 培养皿或 5 孔培养皿
• 20ml 注射器,16gax1” 针头
• IVF 导管,1ml 三件式注射器,直头 5.5” 长止血钳
• 计时装置
• 20ml 乙二醇 (EG) 冷冻培养基
• 针头过滤器
• 胰蛋白酶试剂盒和保持培养基(如果胚胎用于出口)

 第 4、5、6 和 7 阶段可以接受冷冻,注意第 7 阶段扩大的囊胚导致冷冻/解冻妊娠的可能性比其他阶段低 5-10%。

冷冻在所有阶段都会损害一定百分比的卵裂球,这主要是由细胞内的冰晶形成引起的。 低于第 4 阶段的胚胎冷冻/解冻后的存活率很差,因为它们开始时只有几个卵裂球,并且由于冰晶损伤而失去细胞会导致很大百分比的损失。 通过在 -6°C 下晶种诱导冰晶形成,与让 EG 介质在低于 -15°C 的温度下自发结晶的情况相比,冰晶更小且破坏性更小。

由于透明带是一种有效的病原体屏障,因此所有冷冻胚胎都必须具有完整的透明带(无破裂/无裂缝)。 微生物学研究表明,透明带是大多数牛疾病的极好屏障。 彻底清洗具有完整透明带的胚胎将完全去除大多数病原体的所有痕迹。 因此,IETS 强烈建议和进口国要求所有胚胎在暴露于 EG 冷冻培养基之前在 12 个单独的浴槽中洗涤。

为确保透明带的完整性,必须以不低于 50 倍的放大倍率在其整个表面积上检查每个洗涤后的胚胎。 胚胎在培养皿中轻轻滚动,以便检查透明带的所有表面是否有裂缝。 该评估应在十二次洗涤后和冷冻前进行。 如果胚胎不是用于出口,冷冻前不需要清洗。

IETS 推荐的洗涤程序要求通过使用 1:100 稀释度的 12 次培养基更换,将胚胎分成 10 组或更少组,全部来自同一供体。 例如,如果培养皿孔中含有 1cc 洗涤培养基,则将胚胎吸入 10ul 或更少的培养基中,然后将胚胎转移到下一个孔中,在两次洗涤之间更换无菌吸头。

目前,只有传染性牛鼻气管炎病毒 (IBRV) 和水疱性口炎病毒 (VSV) 已被证明如此牢固地粘附在透明带上,以至于正常的洗涤程序不会将它们去除。 暴露于这两种病毒的胚胎需要用胰蛋白酶处理以使其无感染性。 因此,如果进口国指定不含 IBRV 和 VSV 的胚胎,则必须使用十二步胰蛋白酶洗涤。 
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