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给牛做冲胚需要哪些设备和耗材

作者:admin | 发布时间:2023-03-24 10:35 | 标签:胚胎移植胚胎移植耗材设备耗材
给牛做胚胎移植需要用到很多设备和耗材,下面讲一下冲胚都需要哪些东西:

• D-PBS 杜氏磷酸盐缓冲液
• Y 型管
• 导管和探针
牛马胚胎细胞过滤器

卵母细胞胚胎过滤器

 
• 20cc 和 6cc 注射器
• 18ga x 1.5” 针头
• Lidocaine
• 止血钳和剪刀
• 乳胶检查手套
• 立体变焦双目显微镜
 
确保实验室工作台干净、无尘无烟、无通风且(理想情况下)温度受控。大多数农场收集要求您在客户的谷仓、奶罐室、挤压槽旁边的阴凉区域下设置实验室设备,或者偶尔客户会建一个房间专门用于牛胚胎移植。

只要有可能,最好在较冷 (10-23℃) 的实验室室温下工作,而不是在较暖的温度下工作。当显微胚胎离开子宫并进入过滤装置时,温暖的温度会增加胚胎的新陈代谢,从而加速子宫外胚胎的死亡。不幸的是,收集介质不能完全替代胚胎所在的子宫液。

超排卵供体母牛第 7 天的胚胎通常位于每个子宫角的上三分之一。因此,牛角冲洗将 100% 的恢复培养基引导到最有可能发现胚胎的牛角的前半部分。以下顺序描述了准备用于收集的项目。

对牛做冲胚演示图

选择一袋 1 升的 D-PBS(磷酸盐缓冲盐水),其中含有表面活性剂聚乙烯醇 (PV)。早期版本的收集培养基要求您在收集前立即添加血清产品,但今天 95% 的收集使用补充有 PV 和低水平抗生素庆大霉素和卡那霉素的 D-PBS。 这方面的一个例子是 BioLife Advantage™ 收集培养基。

将 Y 形管组连接到冲洗袋。 合上两个夹紧夹,然后将管子的尖头端插入袋子的尖头端口。 将过滤装置连接到管组的另一个长臂上。 如果收集了多个供体,请用永久性记号笔将供体的名字写在过滤器侧壁上。 保持管组的导管适配器端密封或夹紧。

从 Y 型管组中吹扫空气,同时让 PBS 流入过滤装置,直到过滤器中有 20-30 毫米的 PBS 深度。 这是通过打开两个管夹、用止血钳关闭通向 Foley 连接器的短管部分,然后打开过滤器流出端口上的夹夹来实现的。 接下来,将升袋侧放在桌子上,然后将管道和过滤器降低到桌子表面以下。 握住杯式过滤器,使流出口的开口端朝上。 重力会使介质流过管道并进入滤杯。 当杯子包含 20-30 毫米深度的介质时,关闭所有夹紧夹并将管道和过滤器放回桌面。

选择并测试双向 Foley 导管。 长 (23”) 硅胶导管很受欢迎,因为它们可以高压灭菌和重复使用,并且专为牛胚胎收集而设计,至少有六个大的偏置孔眼以最大限度地提高收集效率。 这方面的一个例子是 Vortech™ 导管。 或者,可以使用带两个孔眼的 18 英寸长一次性乳胶导管。

您还必须选择导管直径,称为法国 (fr) 尺寸或规格。 大多数牛 ET 导管的规格为 12fr 至 24fr(偶数递增)。 我建议您选择直径最大的导管,使用正常的操作努力即可通过特定供体的子宫颈。 16fr 导尿管将通过大多数处女小母牛,而 18fr 和更大的导管是奶牛的流行选择。

然后根据球囊(袖带)容量选择导管,5cc 或 30cc 球囊容量。 将 15cc 的空气注入 5cc 模型会导致袖带充气高/高,水平宽度约为 20mm,而 30cc 袖带充气高度较低且水平轮廓较宽。 球囊的选择是个人偏好,取决于您触诊充气的难易程度和袖带在子宫角内的位置。

让几滴冲洗介质从 Y 形管的 Foley 端滴入导管,然后将无菌不锈钢探针插入导管。 当导管不在供体中时,始终将导管放在无菌袋中,以保持其清洁。 使用 20 毫升的注射器和包装中的导管,用 20 毫升的空气给气球充气,然后将所有 20 毫升的空气从气球中抽出。 将导管朝管心针的中心向后拉伸 0.5 英寸,然后使用止血钳将导管中心 0.25 英寸的后端轻轻夹在管心针上后,导管准备就完成了。 通过将 18ga x 1.5" 针头连接到 6cc 注射器来准备硬膜外注射器。 吸出 5-6cc 的 2% 利多卡因,然后盖住针头。

准备一个带有 4cc Estrumate 的 6cc 注射器(18ga x 1.0” 针头),收集后将提供给供体母牛。 这用于启动多个 CL 的消退,并应在 4-6 天内引起发情期。 让供体母牛在收集后循环,可以防止她因在冲洗过程中未恢复的胚胎而怀孕。

其他应放在您的收集托盘上的物品包括几个齐肩袖和乳胶检查手套、三个止血钳、利多卡因瓶和更多针头,以及用于记录卵巢结构和体积的纸和铅笔。

组装显微镜并测试照明器。组装胚胎冷冻仪,但不要在液氮罐中添加氮气。

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