1、关于冷冻保存技术

牛胚胎的冷冻保存主要针对桑椹胚、早期囊胚以及受精后7～8天的囊胚，大致可分为慢速冷冻法（程序化冷冻法）、超快速冷冻法或玻璃化冷冻法等。

迄今为止，已经开发了诸如逐步去除冷冻保护剂的分步法和将其在吸管中稀释的一步法等技术，但目前允许直接从吸管中解冻移植的直接法，已经成为主流了。本节主要对程序化冷冻法进行概述，详细技术请参阅专业书籍。

（1）牛胚胎程序化冷冻法

检查生长阶段和形态后，将细胞浸入含有冷冻保护剂（甘油、乙二醇等）的冷冻保存液中，冷冻保护剂渗透到细胞内，平衡细胞内外的渗透压。平衡后，将胚胎与储存溶液一起吸入 0.25 ml 玻璃化吸管中。

然后，将必要的信息直接印在吸管表面或印在标签上并粘贴在其​​上。

密封后，将吸管浸入设定在冷冻保存液冰点附近的程序冷冻仪中，通过程序冷冻仪进行程序化冷冻，具体如何操作程序冷冻仪可以参考之前的文章 程序控制降温仪的使用方法 ，不同的冷冻仪使用方法有差别，请根据实际情况做调整。等到胚胎冷冻完成后将其放入液氮罐中进行保存。



（2）超快速冷冻法或玻璃化冷冻法

与程序化冷冻相比，这是一种将胚胎在高渗透压和添加高浓度冷冻保护剂的玻璃化溶液中平衡，然后立即保存在液氮中的方法。

（3）冷冻胚胎的处理

储存在液氮中的吸管暴露在外界空气中会导致吸管内部的温度迅速升高，增加胚胎受伤的可能性。 如果您在有风的地方进行此操作，风险会变得更加明显，但即使在无风的情况下，也严格禁止将其长时间暴露在室外空气中。

（4）熔化基础知识

将吸管在无风的地方在空气中放置一定时间，然后浸入温水中解冻。当像冷冻精液一样直接浸入热水中时，胚胎可能会遭受损伤。另外，如果在空气中或有风的情况下放置时间过长，吸管内的温度会升高，细胞内部和周围都会失透，造成胚胎细胞的渗透损伤和细胞内冻结，将会受到致命的伤害。

破裂损伤和失透造成的损伤根据冻存液的成分、冷却条件、吸管材质等的不同而有所不同，因此请遵循冷冻胚胎制造商发布的解冻手册。温度计和计时器对于正确解冻至关重要。

储存解冻的胚胎、将其连接到转移装置以及连接吸管后储存转移装置通常在 20 至 30°C 的温度下进行，但请遵循冷冻胚胎制造商的说明。另外，请务必在解冻后尽快移植胚胎。

2、关于移植技术

将胚胎移植到受体牛存在黄体的一侧（黄体侧）的子宫角中。 移植到对侧子宫角并不意味着不会受孕，但不可否认的是受孕率有较低的趋势。还有报道称，如果子宫角植入黄体侧较深或中央，受孕的可能性会更高。

移植的基本程序与人工授精几乎相同，但必须使用鞘管盖，以防止阴道细菌带入子宫。