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奶牛OPU采卵后的卵泡收集

作者:admin | 发布时间:2023-12-15 16:17 | 标签:牛卵母细胞OPU卵泡收集
在通过活体采卵仪将母牛卵母细胞采集到离心管中后,需要对卵泡进行检索,将好的卵泡检出来,坏的剔除。母牛卵母细胞搜索的执行方式与内部胚胎搜索相同,使用立体显微镜放大 10 至 20 倍。寻找内胚时,为了找到透明带,会调整反射镜,使透明带在体视显微镜下发出明亮的光,但寻找卵子时,卵子的质量越高,就越有可能找到透明带。透明带不直接可见,因为卵丘细胞是附着的。 因此,应调整反光板,使明暗分明。

下面显示如何调整体视显微镜:

① 打开体视显微镜
② 调整反光板角度
③ 在观察样品的同时,将放大倍数调至最大并调整焦距。
④ 设置最小放大倍率
⑤ 转动左目镜调节焦距
⑥ 转动右目镜调节焦距
⑦ 即使改变放大倍率,物体也会聚焦,双眼也会聚焦,更容易观察。

如何收集检索牛卵泡

将网格(间隔约 10 毫米)连接到 90-100 毫米培养皿上,并仔细地搜索每个网格。使用搜索棒或吸卵移液器清除异物并寻找卵泡。 第一次搜索后,用搜索棒或装有橡胶球的巴斯德吸管充分搅拌,然后再次搜索。 寻找卵泡时,用巴斯德移液器移液被认为比用搜索棒搅拌更有效。 倾斜培养皿以吸出血凝块并用移液器将其松开。 尽可能多地移液,使所有污染物进入移液器中。 虫卵通常附着在异物或血凝块上,人们认为移液可以将它们移走。然后,一次一格地再次搜索卵泡。 当一个人看过它两次并且两个人看过它两次时,对那个培养皿的搜索就结束了。

作为卵子检索的注意点,因为卵子周围附着着卵丘细胞,所以有不能直接识别为卵子的东西,成为忽略卵子的原因。习惯了体内胚胎检索的技术人员可以检索卵丘细胞脱落的卵子,但是很多技术人员忽略了被卵丘细胞大量包裹的卵子。特别是初学者要理解和确认卵丘细胞的形状,如果有这样形状的细胞块的话,如果将该块翻过来的话,经常能看到卵子细胞质,所以一定要进行翻过来的作业,卵子的看漏会变少。另外,通过去除果子露中的上清液,搜索变得容易。

将回收的卵子添加到含有10%小牛血清的DPBS中。将卵收集在含有添加的保存液的35mm培养皿中,并用该溶液彻底清洗后,对卵进行评估和培养以使其成熟。此外,如果污染物含量极多,用巴斯德移液器移液可能会使卵丘细胞分离,因此我们建议将其作为最后的手段。