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牛体外胚胎的生产流程

作者:恒锦莱牛马活体采卵胚胎移植设备厂家 | 发布时间:2024-06-04 11:29 | 标签:牛胚胎生产体外胚胎

牛体外胚胎生产(IVP)是一种通过人工控制条件使牛的卵子和精子在体外结合并发育成胚胎的技术。这一过程对于遗传改良、品种繁育等方面具有重要意义。下面是牛体外胚胎生产的一个基本流程:


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在牛卵泡抽吸后20分钟内,将回收的卵母细胞在含有10%FCS的HEPES缓冲TCM 199(H 199)中洗涤两次,然后分配到含有补充有0.5μg/ ml FSH,5μg/ ml L LH,0.8mM L-谷氨酰胺,50μg/ ml二庆大霉素和15%牛血清(BS)的相同培养基的15mL Falcon管中,并保存在39°C的便携式培养箱中进行体外成熟。


20-22小时后,将体外成熟的卵母细胞洗涤并转移到300μl覆盖有矿物油的IVF培养基中,该培养基由Tyrode的改性培养基组成,不含葡萄糖和BSA,补充有5.3USP / ml肝素,30μM青霉胺,15μM次牛磺酸,1μM肾上腺素和1%BS。 将Podolic公牛的冷冻精液吸管在37°C下解冻40秒,并选择精子通过Percoll不连续梯度(45%和80%)和离心(25分钟,300g)。将沉淀复溶到2ml的IVF培养基中,并以160和108g离心两次10分钟。用IVF培养基稀释沉淀,并以1×10的浓度加入受精滴(50μl)中6精子/毫升。


配子在39°C下在5%CO中共孵育20小时2在空气中,然后将推定的受精卵涡旋2分钟,以去除HEPES TCM中含5%BS的积云细胞,洗涤并在合成输卵管液(SOF)培养基中培养,含有 30 μl/mL 必需氨基酸、10 μl/mL 非必需氨基酸和 5% BS 的 5% CO 加湿混合物2,7% O2和 88% N2在温度为39°C的空气中。 对于IVC,为了利用群体胚胎培养的潜在好处,同时将每只动物的受精卵分开,使用了特殊的培养皿,设计了一个中央井,分为四个象限,由柱子隔开,以允许象限之间的培养基交换,而不允许胚胎移动。在第 7 天(第 0 天 = IVF),记录了卵裂率和囊胚率。