一、对牛胚胎优劣评估
牛胚胎通过50至100倍放大倍率的形态学检查进行分类和评估。牛胚胎的总直径为150至190μm,包括12至15μm的透明带厚度。根据下面讨论的几个因素,胚胎的质量被评估和分级为 优秀,良好,一般和差。
质量评估
优秀: 理想的牛胚胎,球形,对称,细胞大小,颜色和质地均匀。
良好: 小瑕疵,如一些挤压的卵裂球,不规则的形状和一些囊泡。
一般: 可见更明确的问题,包括存在挤出的卵裂球、水疱和一些退化细胞
差: 严重的问题,许多挤出的卵裂球,退化的细胞,不同大小的细胞,大而多的囊泡,但显然是可行的牛胚胎块。这些通常不具有可转让的质量。
胚胎发育阶段评估
牛胚胎也根据其发育阶段进行评估,而不考虑质量。建议选择胚胎发育的阶段,以实现受体的同步。
胚胎储存
供体牛胚胎可以立即转移到受体中,也可以储存以备将来使用,因此可能是有必要储存牛胚胎,直到合适的受体母牛可以移植。
a.短期存储
牛胚胎可以在室温下储存一天,以便从供体直接转移到受体。在24至72小时内,牛胚胎必须储存在4°C的PBS,培养基199或培养基L15中,每个都补充了50%的FBS。大多数培养基和培养系统足以维持供体和受体之间胚胎的活力。
b.长期储存
如果要将牛胚胎运输到很远的距离或无法立即获得合适的受体,则长期存储系统至关重要。深度冷冻牛胚胎在液氮(-196°C)中无限期储存。通过胚胎冷冻仪进行冷冻长期储存通常会导致30%至50%的储存牛胚胎受损。损伤通常是由牛胚胎细胞内的冰晶形成引起的。尽管冷冻解冻牛胚胎的平均存活率约为65%,但长期储存牛胚胎仍然是有利可图的。
二、受体母牛的选择、牛胚胎移植和移植后的管理
1、选择受体母牛
正确的受体群体管理对于牛胚胎移植的成功至关重要。繁殖能力良好、易于产犊、具有良好的挤奶和母乳能力的奶牛是接受者的前景。他们必须处于适当的营养水平(肉牛的身体状况得分为 6,奶牛身体状况得分为 3 至 4)。这些奶牛还必须参加健全的牛群健康计划。
2、受体母牛的同步发情
为了最大限度地提高移植后受体母牛的胚胎存活率,受体生殖道的状况应与供体中的条件非常相似。这需要供体和受体之间的发情周期同步,**在一天之内。受体的同步可以以与供体牛类似的方式和相同的工作时间完成。