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牛胚胎的处理、评估和储存

作者:admin | 发布时间:2023-06-16 14:35 | 标签:胚胎评估胚胎冷冻胚胎储存牛胚胎
在收集和移植之间小心处理牛胚胎对于防止病原体的传播是必要的。牛胚胎在通过直径约为10-50μm的孔的过滤器过滤收集培养基后,用立体解剖显微镜在70X放大镜下定位。牛胚胎通常保存在与收集胚胎相同或相似的培养基中。培养基必须缓冲以保持 7.2 至 7.6 的 pH 值,渗透压摩尔压约为 300 摩尔渗透压。Dulbecco的PBS或含有Hepes缓冲液并富含FCS和抗生素的更复杂的培养基通常用于现场。更复杂含有碳酸盐缓冲液的培养基通常可产生优于牛胚胎长期培养的结果。

牛胚胎

一、对牛胚胎优劣评估


牛胚胎通过50至100倍放大倍率的形态学检查进行分类和评估。牛胚胎的总直径为150至190μm,包括12至15μm的透明带厚度。根据下面讨论的几个因素,胚胎的质量被评估和分级为 优秀,良好,一般和差

质量评估

优秀: 理想的牛胚胎,球形,对称,细胞大小,颜色和质地均匀。
良好: 小瑕疵,如一些挤压的卵裂球,不规则的形状和一些囊泡。
一般: 可见更明确的问题,包括存在挤出的卵裂球、水疱和一些退化细胞
差: 严重的问题,许多挤出的卵裂球,退化的细胞,不同大小的细胞,大而多的囊泡,但显然是可行的牛胚胎块。这些通常不具有可转让的质量。

胚胎发育阶段评估

牛胚胎也根据其发育阶段进行评估,而不考虑质量。建议选择胚胎发育的阶段,以实现受体的同步。

牛胚胎发育阶段

胚胎储存

供体牛胚胎可以立即转移到受体中,也可以储存以备将来使用,因此可能是有必要储存牛胚胎,直到合适的受体母牛可以移植。

a.短期存储

牛胚胎可以在室温下储存一天,以便从供体直接转移到受体。在24至72小时内,牛胚胎必须储存在4°C的PBS,培养基199或培养基L15中,每个都补充了50%的FBS。大多数培养基和培养系统足以维持供体和受体之间胚胎的活力。

b.长期储存

如果要将牛胚胎运输到很远的距离或无法立即获得合适的受体,则长期存储系统至关重要。深度冷冻牛胚胎在液氮(-196°C)中无限期储存。通过胚胎冷冻仪进行冷冻长期储存通常会导致30%至50%的储存牛胚胎受损。损伤通常是由牛胚胎细胞内的冰晶形成引起的。尽管冷冻解冻牛胚胎的平均存活率约为65%,但长期储存牛胚胎仍然是有利可图的。

二、受体母牛的选择、牛胚胎移植和移植后的管理


1、选择受体母牛

正确的受体群体管理对于牛胚胎移植的成功至关重要。繁殖能力良好、易于产犊、具有良好的挤奶和母乳能力的奶牛是接受者的前景。他们必须处于适当的营养水平(肉牛的身体状况得分为 6,奶牛身体状况得分为 3 至 4)。这些奶牛还必须参加健全的牛群健康计划。

2、受体母牛的同步发情

为了最大限度地提高移植后受体母牛的胚胎存活率,受体生殖道的状况应与供体中的条件非常相似。这需要供体和受体之间的发情周期同步,最好在一天之内。受体的同步可以以与供体牛类似的方式和相同的工作时间完成。


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